本生知識分享：人γ干擾素(IFN-γ)elisa試劑盒樣本的收集和保存

　　γ-干擾素(Interferon-γ,IFN-γ)是水溶性二聚體細胞因子 。是II型干擾素的成員。*初叫巨噬細胞活化因子。中文名 γ干擾素 外文名 Interferon-γ,IFN-γ 歸 類II型干擾素 原 名巨噬細胞活化因子。γ-干擾素具有抗病毒、免疫調節(jié)及抗腫瘤特性。可以與結合到γ-干擾素受體(IFNGR)，γ-干擾素受體(由兩個亞基組成。γ-干擾素結合并激活其受體調節(jié)JAK-STAT通路。γ-干擾素激活抗原提呈細胞，通過上調轉錄因子T-bet而促進I型輔助T細胞(Th1細胞)的分化。γ-干擾素是I型輔助T細胞(Th1細胞)的標志性的細胞因子。II型輔助T細胞(Th2細胞)釋放白細胞介素-4 (IL-4) 和白細胞介素-13 (IL-13)。自然殺傷細胞和CD8T細胞也產(chǎn)生γ-干擾素。γ-干擾素通過迅速降解RANK-RANKL信號通路的TRAF6而抑制破骨細胞形成。

　　標本的采集和保存

　　ELISA試驗所用標本主要為血清，也可以用經(jīng)過預處理的唾液、尿液、糞便等生物材料。患者標本可能含有干擾試驗的免疫物質，導致假陽性或者假陰性的結果，干擾因素一般可分為兩類，即內源性和外源性干擾因素。內源性干擾因素包括類風濕因子、補體、高濃度的非特異性免疫球蛋白等，避免內源性干擾因素主要通過選擇合理的試劑。外源性干擾因素包括標本溶血、標本被細菌污染、儲存時間過長及標本凝固等。在血液采集和運輸過程時，應注意避免溶血。否則，紅細胞溶解時會釋放出血紅蛋白，血紅蛋白中的亞鐵血紅素具有過氧化物酶活性的物質，在以HRP為標記的ELISA試驗測定中，可能會增加非特異性顯色而出現(xiàn)假陽性結果。血清標本適宜在新鮮時檢測，若推遲檢測需將標本低溫保存。一般說來，在7天內檢測的血清標本，可放置于2℃~8℃保存，超過1周檢測的需低溫冰存。因反復冰融會使抗體效價降低，所以，對需要保存做多次抗體測定的血清標本，應少量分裝并冰存。血清標本應充分離心，否則可因殘留的纖維蛋白原非特異吸附于微孔而造成假陽性結果。

　　加樣操作中，依次有3次加樣，即加標本、加酶結合物、加底物。加標本一般采用手工加樣或者加樣器。手工加樣每次必須更換吸嘴，以避免交叉感染。要掌握好并在實際操作中揣摩使用技巧，避免吸樣量過多或過少。加樣器在長時間使用時會因機械磨損或推動桿內附著的血痂等原因造成加樣不準，因此必須定期對加樣器進行維護和校準。加酶結合物和底物一般可直接滴加。每次加樣時，應將所加物置于ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，注意不可濺出，不能產(chǎn)生氣泡，加酶試劑后要用吸水紙在酶標板上輕輕擦拭吸干。加底物操作時應注意各試劑盒顯色劑不能混用，添加順序不能顛倒，不能濺出孔外。標本較多時，需要分批操作，以免加樣板過多，造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(尤其是在室溫較高時)。*后，在微型振蕩器上震蕩lmin，以保證混勻。

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