實(shí)驗(yàn)中微孔板使用常見到的一些問題匯總

　　Q1：如何選擇微孔板的顏色?

　　1)熒光檢測

　　黑色微孔板能吸收光，因此可抑制自發(fā)熒光的影響，適用于 GFP、熒光素、Cy3 和 Cy5 等 短半衰期(納秒～微秒)熒光檢測。對于使用半衰期較長(微秒~毫秒)的鑭系元素螯合物 等的檢測，可使用時(shí)間分辨熒光檢測法來避免自發(fā)熒光影響，通常推薦使用白色微孔板， 但如果檢測中存在較大的交叉干擾，則需要使用黑色微孔板。

　　2)發(fā)光檢測

　　通常使用光反射效率較高的白色微孔板。如需避免交叉干擾，可使用灰白色 、灰色或黑色 微孔板。此外，磷光(指微孔板等物質(zhì)受到熒光燈等光的照射后蓄存發(fā)光的現(xiàn)象)也是造 成背景增強(qiáng)的原因之一。黑色微孔板可抑制這種現(xiàn)象帶來的影響。對于白色微孔板，在檢 測前將其遮光約 10 分鐘以達(dá)到暗適應(yīng)，即可降低磷光影響。

　　Q2：關(guān)于邊緣效應(yīng)的問題

　　關(guān)于邊緣效應(yīng)的類型與解決方案的信息如下：

　　①溫度梯度：可通過在測定前將微孔板的溫度預(yù)先調(diào)整為與檢測儀相同的溫度來解決。

　　②蒸發(fā)：可使用板蓋或密封膜來防止蒸發(fā)。此外，將培養(yǎng)箱內(nèi)的濕度設(shè)到 100%附近也有幫 助。

　　③針對細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的邊緣效應(yīng)，有報(bào)告稱在將微孔板放入 37℃的培養(yǎng)箱前，先將微孔 板置于室溫下預(yù)孵育 1 小時(shí)可有助于細(xì)胞均勻粘附。

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